夏廷毅
主任醫(yī)師
北京華信醫(yī)院
2018-12-15 14:26
DNA測序的方法有很多種，目前最常見的是雙脫氧終止法了。在測序用的緩沖液中含有四種dNTP及聚合酶，測序時分成四個反應(yīng)，每個反應(yīng)除上述成分外分別加入2,3-雙脫氧的A、C、G，T核苷三磷酸(稱為ddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTP)，然后進行聚合反應(yīng)。在第一個反應(yīng)物中，ddATP會隨機地代替dATP參加反應(yīng)一旦ddATP加入了新合成的DNA鏈，由于其3位的羥基變成了氫，所以不能繼續(xù)延伸。所以第一個反應(yīng)中所產(chǎn)生的DNA鏈都是到A就終止了。同理第二個反應(yīng)產(chǎn)生的都是以C結(jié)尾的，第三個反應(yīng)的都以G結(jié)尾，第四個反應(yīng)的都以T結(jié)尾, 電泳后就可以讀出序列了。
